你需要知道的層析柱知識
更新時間：2020-03-27
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收好這一份層析柱使用指南，幫您在實驗過程中從容應(yīng)對各種突發(fā)狀況，更好的完成實驗操作。
1.層析柱進(jìn)氣泡怎么辦？
空氣進(jìn)入，如緩沖液走空，連接進(jìn)入系統(tǒng)過程中
○ 用純水反向沖洗，如果有柱位閥可直接切換流向，沒有的話可將柱子反接
○ 對于大多數(shù)層析柱來說可用乙醇沖洗，以提高排氣效率
緩沖液中有氣泡
○ 上柱前將緩沖液脫氣
○ 在緩沖液入口使用空氣感應(yīng)器
溫度影響，如在冷室操作后馬上在室溫操作，或低溫緩沖液直接在室溫使用
○ 將緩沖液在使用前達(dá)到熱平衡
2.層析柱干了還可以再使用嗎？
○ 通常不可以，但也取決于具體的純化需求。
3.膠平面與柱頭有間隙怎么辦？
由于不當(dāng)裝填或者篩網(wǎng)孔徑與填料粒徑不匹配，導(dǎo)致填料漏出
○ 更換篩網(wǎng)，重新裝填，層析柱堵塞，導(dǎo)致反壓增大
○ 根據(jù)說明書清洗
○ 更換濾膜
○ 樣品上柱前先澄清
柱床裝填太差，裝柱過程中未有效壓縮填料
○ 調(diào)整柱頭高度，測柱效填料被用于條件，如有機溶劑
○ 檢查緩沖液，選擇合適的緩沖液條件
4.怎樣避免由于樣品導(dǎo)致的壓力增大？
顆粒性物質(zhì)——堵塞濾膜和層析柱
○對于濾膜吸附較高的的樣品，體積較小時，可以用離心代替過濾，比如10000g離心15分鐘
○ 細(xì)胞裂解液可50000g離心30分鐘
○ 可以使用醋酸纖維素膜或者PVDF膜，其對蛋白的非特異性吸附較低
○ 選擇合適孔徑的濾器
沉淀或者聚體堵塞層析柱
○ 過濾
○ 通過改變pH，加鹽或添加劑穩(wěn)定樣品或減少聚體產(chǎn)生
○ 避免機械壓力和過高的蛋白濃度
核酸——過高粘度可能會封閉填料上的配基
○ 加入核酸酶
○ 使用硫酸鏈霉素，聚乙烯亞胺或硫酸魚精蛋白沉淀
脂類——可能封閉填料上的配基或堵塞濾膜和層析柱
○ 離心
○ 使用硫酸銨，硫酸葡聚糖或PVP沉淀
